Khuẩn lạc là gì? Các cách đếm khuẩn lạc

Khuẩn lạc là loại vi sinh khoản tích tụ lại thành một cụm (Colony), có thể quan sát được bằng mắt thường, sinh khối của vi khuẩn khi chúng phát triển trên bề mặt giá cứng. Hiện nay, có 2 cách đếm khuẩn lạc là thủ công và tự động. Để biết thêm chi tiết khuẩn lạc là gì? Các cách đếm khuẩn lạc sao cho chính xác và nhanh mời bạn tham khảo qua bài viết của Shopthinghiem.com ngay sau đây.

Vi khuẩn lạc là gì?

Khuẩn lạc là một loại vi khuẩn tích tụ thành một khối lớn, có thể nhìn thấy được bằng mắt thường. Sinh khối của vi khuẩn phát triển trên bề mặt của giá thể cứng. Trong trường hợp khuẩn lạc phát triển từ một tế bào gốc, thì bộ gen của chúng có mã như nhau, và chúng được gọi là một dòng. Người ta phân loại khuẩn lạc dựa vào: Màu sắc, môi trường nuôi cấy và hình dạng khuẩn lạc.

Đơn vị tính khuẩn lạc

Hiện nay theo cơ quan Tổ chức Tiêu chuẩn hóa Quốc tế (ISO) và Cơ quan bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ (EPA) có hai đơn vị tính khuẩn lạc là CFU và MPN. Vậy CFU, MPN là gì? Mời bạn theo dõi phần tiếp theo.

CFU là gì

Đơn vị hình thành khuẩn lạc CFU( tên đầy đủ là Colony form units) là đơn vị đo lường để ước lượng số lượng khuẩn lạc hoặc tế bào nấm trong một mẫu thử nghiệm. Khi kiểm nghiệm vi sinh vật có trong mẫu thử người ta dùng cách đếm khuẩn lạc trên đĩa Petri hoặc địa môi trường chuẩn bị sẵn (Chẳng hạn như địa Compact Dry). Đơn vị đo lường của khuẩn lạc thường là CFU/25g, CU/g, CFU/mL.

Đơn vị CFU/25G, CFU/g thường dùng cho mẫu ở dạng rắn ( như phân bón, thực phẩm, nguyên liệu thực phẩm,…

Đơn vị CFU/mL: Dùng cho mẫu thử ở dạng lỏng (như phân bón, nước nuôi trồng thuỷ sản, nước trái cây,…)

MPN là gì

MPN (Most Probable Number) ý nghĩa là số có xác xuất lớn.MPN là đơn vị thường dùng để biểu thị số lượng vi khuẩn trong trong thể tích nhất định của mẫu lỏng. Đây là phương pháp phổ biến để ước lượng C.Tyrobytyricum trong sữa.

Khác biệt giữa CFU và MPN là gì

CFU là đơn vị ước lượng khuẩn lạc có trong 1g mẫu thử nghiệm nhất định. CFU thường được tính theo phương pháp cây trong trong hoặc đổ đĩa. Mặt khác, MPN được tính bằng phương pháp lên men.

Đối với CFU, vi khuẩn sinh sống và phát triển trên môi trường đặc (như thạch), sau đó khuẩn lạc được đếm bằng phương pháp thủ công hoặc hiện đại. Còn đối với phép đo MPN, mẫu được nuôi cấy trong môi trường lỏng (như lên men). Kết quả không đếm thủ công mà dùng cách so sánh với bảng xác suất.

MPN và CFU về mặt ý nghĩa tương đương nhau. Cả hai đơn vị tính khuẩn lạc đều được công nhận bởi nhiều tổ chức quản lý và khoa học trên thế giới. Trong đó có cơ quan Tổ chức Tiêu chuẩn hóa Quốc tế (ISO) và Cơ quan bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ (EPA).

Các cách đếm khuẩn lạc

Với số khuẩn lạc lớn như thế làm sao để đếm nhanh và chính xác? Có hai cách đếm khuẩn lạc là phương pháp thủ công và hiện đại. Bạn có thể tham khảo hai cách đếm dưới đây.

Phương pháp đếm khuẩn lạc thủ công

Đối với cách đếm thủ công, chúng ta cần chuẩn bị môi trường nuôi cấy, hoà tan các thành phần trong dung dịch. Khử trùng ở nhiệt độ 121 độ C và áp suất 1 atm trong 20 phút. Trước khi đếm khuẩn lạc, cần làm tan chảy hoàn toàn môi trường agar trên lò vi sóng hoặc bếp điện.

Lưu ý công việc chuẩn bị và các thao tác thực hiện cần trong môi trường vô trùng. Các dụng cụ, thiết bị sử dụng cần tiệt trùng trước khi thực hiện, tránh sai sót trong quá trình đếm khuẩn lạc.

Các bước thực hiện:

• Bước 1: Cân 25g mẫu vào bình Erlen chứa 225mL dung dịch pha loãng đã khử trùng (dung dịch có độ pha loãng 10-1). Đồng nhất mẫu bằng máy lắc trong 30 phút.
• Bước 2: Hút 1 mL dung dịch vừa pha loãng và đồng nhất mẫu ở nồng độ 10-1 lần lượt vào ống nghiệm 9mL để được mẫu có nồng độ lần lượt là 10-2, 10-3, 10-n tùy theo đối tượng mẫu.
• Bước 3: Hút 1mL vừa pha loãng ở Bước 2 cho vào đĩa petri.
• Bước 4: Cho thêm khoảng 12 – 15mL môi trường thạch ở đĩa petri nhiệt độ 44 – 47 độ C. Trộn đều dung dịch pha loãng bằng cách xoay đĩa petri trên bề mặt nằm ngang.
• Bước 5: Sau một thời gian hỗn hợp đông đặc hoàn toàn, lật ngược các đĩa đã chuẩn bị cho vào tủ ấm. Ủ trong 48 tiếng.

Phương pháp đếm khuẩn lạc tự động

Đối với phương pháp đếm khuẩn lạc thủ công có nhược điểm mất khá nhiều thời gian và có thể mắc sai sót trong quá trình đếm. Do đó, để cải thiện tình trạng này, một số phòng thí nghiệm sử dụng máy đếm khuẩn lạc. Nguyên lý hoạt động của máy này là chụp lại petri có chứa khuẩn lạc, sau đó tách ra khỏi nền và sử dụng thuật toán để đếm số lượng khuẩn lạc trong đĩa.

Tuy nhiên, thuật toán cũng gặp nhiều khó khăn trong việc phân biệt các khuẩn lạc, bởi chúng quá nhiều và chồng lẫn nhau.

Shopthinghiem.com là giải pháp tối ưu cho các phòng thí nghiệm, nhà máy chuyên kiểm nghiệm vi sinh trong mẫu thử. Là đơn vị hoạt động chuyên cung cấp các máy móc, thiết bị khoa học, kit hỗ trợ việc kiểm tra khuẩn lạc nói riêng và vi sinh nói chung một cách nhanh chóng và chính xác.

Để biết thêm thông tin chi tiết, bạn vui lòng điền form thông tin dưới website để nhân viên tư vấn hỗ trợ bạn. Cảm ơn vì đã dành thời gian đọc bài viết.

Nguồn tham khảo: Centers for Disease Control and Prevention